战友CZj99：我对于微生物基因诊断很感兴趣，微生物基因诊断，在快速，准确等方面有自已独特的优势。请问：微生物基因诊断与临床的治疗如何有效的结合，如HBV可用拷贝数判断疗效，细菌的变异，但如何将微生物基因诊断象药敏试验结果指导临床治疗？谢谢！
战友yangjielaila：本人对幽门螺杆菌基因诊断方面很感兴趣，当前尽管诊断幽门螺杆菌现症感染方法很多，也非常成熟并应用您临床。但是目前，因 为幽门螺杆菌耐药性增加，因为培养的延迟性，体外耐药性可能和体内的真是耐药情况不一样等问题，临床上，都是按照所谓一线、二线补救治疗的”且战且走“。
请问：能否通过基因诊断的办法快速、且预先知道患者所感染的幽门螺杆菌对现用的抗生素耐药情况，如阿莫西林，克拉霉素等。谢谢汤教授！
汤教授的答案：
这三个问题均涉及应用基因方法检测病原体耐药。目前已有较好的基因方法检测耐药有关的突变点/基因，如等位基因特异性（allele-specific）PCR及测序。测序分析对混合感染的多重突变点检测灵敏度较低，这时可以采用经典的克隆测序。
但是采用基因分析方法测定耐药的致病问题为：1、许多药物耐药机理不清。2、病原体在不断变异中。
问题六：
战友yuangan：我对于微生物基因诊断在临床在临床微生物中的应用很感兴趣，请问国外临床微生物在医院感染预防控制发挥怎样作用？谢谢！
汤教授的答案：
临床/基因微生物方法至少可在两方面在医院感染预防控制中发生作用。
1、早期快速确定医院感染病原体，帮助及早隔离病人。
2、明确病原体分型，提供病原体间相互联系的分型信息，协助临床发现传染源及传播途径。
问题七：
战友gj2003：我对于细菌诊断及基因分型很感兴趣，请问：用定量PCR做细菌定量检测时如何测定出细菌基因组DNA中的某个特定的保守基因的拷贝数？因为只有这样，才能通过定量这个基因对细菌的个数进行定量（如果我这样理解准确的话）。
汤教授的答案：
你首先要有一个已知数量的该菌对照。这可以是已知菌落形成单位（colony-forming unit）的真正细菌，也可以是已知拷贝数的克隆入该片段的质粒。然后你用不同稀释度的已知对照建立标准曲线。
值得你注意的是，不少基因在不同细菌株中基因数不同。建议采用单基因数或恒定基因数的基因作为定量分析。
问题八：
战友CDMA133：我对于细菌诊断在临床中的应用很感兴趣。请问：正常人体内是存在很多种类细菌的 ，如何通过技术的手段区分那些细菌是致病菌？或是说如何鉴定那些原本不致病的细菌已经变为致病菌呢？同一种细菌，其是致病状态还是不致病状态如何鉴别？谢谢！
战友plasmid15：我对于微生物基因诊断很感兴趣，请问：在病原菌的基因检测中，活菌和死菌都能被检测出来，而在实际生活中，能检测到活菌对我们来讲更有意义，现在有什么方法能检测出活菌吗？
汤教授的答案：
这两个问题涉及到基因检测结果的解释。一个阳性PCR结果可以是正常菌落，污染、定殖（colonization）或感染。可以是隐性感染，也可以是感染 业已受到控制的“死”菌。总的来说，如何判定需要结合临床及样本类型进行综合分析。当然，可以检测一些致病特异性基因（如金葡菌的PVL基因）对致病性进 行评价。治疗以后，可以检测病原体的信使RNA进行疗效考核。
问题九：
战友hxf0511：我对于微生物基因诊断很感兴趣。我来自呼吸科。近些年来，随着新的传染病的出现，如非典型肺炎（SARS），禽流感等，以及肺炎的患病率、住院率的逐年升高，肺部感染备受关注。我的问题：
1、对于住在ICU的病人，其体质差，基础病多，很易感染。早期合理治疗尤为重要， 然而我们传统的微生物培养、生物化学、免疫学等检查，因时间长和敏感性不一的缺陷，常常耽误治疗。微生物基因诊断有何优势？
2、由于抗生素还存在不合理应有的现象，这种由抗生素滥用导致的微生物基因变化，是否会影响到微生物基因诊断？
3、目前微生物基因诊断应用于临床还有哪些瓶颈？谢谢！
汤教授的答案：
如你所说，微生物基因诊断可以较早较灵敏地发现病原体。特别是那些业已应用广谱抗生素的病人。抗生素滥用导致的微生物耐药为我们做临床微生物检测提供了工 作保证Smile，也将促进该行业的发展。试想将来由于多重耐药菌株的产生，临床将无广谱抗生素可作为经验（empiric）治疗的话，临床医生将会应用 快速耐药检测的基因方法所得到的结果指导治疗。
瓶颈还有很多，但主要是基因检测结果的分析判定。我们需要你这样的临床医生一起帮助。
