汤一苇教授：微生物基因诊断在临床微生物学中的地位和应用

问题十：

战友jjgbmt：微生物分子生物学分类对诊断和治疗有意义？我是搞致病念珠菌分类的，很多人说这种分类意义不大，您怎么看？

汤教授的答案：

我认为念珠菌的早期快速分型在临床上有一定的意义。不同的念珠菌种的潜在耐药性不同，而常规的念珠菌耐药性检测费时耗钱。所以早期将念珠菌鉴定到种（species）的水平对指导用药会有帮助。

战友DHZX：我对于肠道致病菌的基因诊断很感兴趣，目前微生物的基因诊断在临床应用很少，一是特异性的问题，二是快速诊断如基因芯片成本太高等原因！请问：有没有切实可行且应用性较高的基因诊断方法应用于临床实验室对肠道致病菌的快速诊断？

我完全同意你的分析，在美国的临床微生物实验室中，肠道致病菌的检查是最最“少、慢、差、贵”的。最近一两年来，有人采用新型质谱（MALDI-TOF）方法对可疑菌落进行快速鉴定，也可望将肠道致病菌的确诊从常规的三天减少到一天左右。

问题十一：

战友yanjie：我们都知道，致病微生物的基因检测在感染性疾病的诊断中有重要作用。由于方法学的进展非常迅速，许多新型技术尚未得到管理部门（在中国 为SFDA）的批准而无法用于临床检测。比如目前我们已经可以用PCR产物直接测序的方法监测HBV核苷类似物耐药变异，但无法用于常规临床工作。请介绍 一下在美国新型检测技术在得到FDA批准前如何应用于临床。

汤教授的答案：

这点上美国的FDA要比中国SFDA“开通”一些。在美国一些具有科研实力且临床要求的一流医学中心通常有自发研制的基因诊断产品，经该中心/医院认真考 核并批准后在该中心/医院内部使用于临床并向病人收费。当然这一切都是在CAP认证的临床试验室中进行，同时需要经过能力验证（proficiency test）。

问题十二：

战友ziman2003：我对于您研究的领域很感兴趣。我的专业是植物病毒的快速检测。请问您，现在 有没有一种很好病毒的快速检测方法。目前，我查阅的常用的就是根据病毒的通用引物扩增病毒DNA。可是这样做很费时间和人力，如果检测的对象很多就不是很 方便，而且假阳性也很多。也有人用杂交或者酶联免疫的方法，这个也比较的费时间。我在想，能不能把植物的叶片或者组织直接取下，特殊的溶液中研磨离心 ，直接荧光定量PCR呢？从叶片到PCR都是一管的。您说行得通吗？或者您有什么好的idea吗？非常谢谢！！

战友carolynzy：我想请教关于临床标本预处理方面的问题。临床标本多种多样，虽然每一类有基本的预处理原则，但即使是同一类标本的个体差异也很大 （如血液标本的血脂含量，溶血等），经过同样的处理，结果也可能差异很大。有些因素可能对检测造成不良影响。请问针对血液、痰、胸水、脑脊液、腹水、尿这 些标本，哪些因素是必须控制好，某些差异可以容忍的呢？

汤教授的答案：

这两个问题涉及标本处理核酸提取。一个好的提取方法可以裂解细胞，稳定核酸，去除抑制物并浓缩核酸。我想任何一种方法只要能够克服抑制物并提高核酸回收量 （没有假阴性）均有应用空间。对于定性分析来讲，标本的种类要求不大。对于定量分析，你可能在上述因素的基础上，可以在标本的处理之前，加入已知数量的 “内对照”基因，这样你可能对核酸的回收量进行质控并调节。

问题十三：

战友juchy3572：我对于微生物检验的发展前景很感兴趣，请问：在未来，微生物基因诊断技术是否会成为微生物检验的主要手段？常规微生物培养、血清学诊断技术是否会逐渐没落，越来越少人用？

汤教授的答案：

微生物基因诊断技术业已成为临床微生物实验室中的一个重要手段。但我觉得其他方法不会没落消失。特别是细菌学方面。我们仍需要分离到病原做常规的药敏试验。如前所述，不是所有病菌耐药机制都已知晓，同时病原体在不断的变异之中。